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双荧光素酶检测【启动子活性分析】
双荧光素酶检测【miRNA对靶基因调控研究】
 
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植物RNAi技术及服务
   RNAi技术是研究基因功能的重要工具。其原理是对某个已知基因,设计诱导其沉默的dsRNA,通过合适手段导入细胞或机体使产生干涉效应的信号分子siRNA,导致基因表达水平下降或完全沉默。通过基因表型变化,鉴定该基因功能。
  1998年,Fire等[1]发现,过去利用正反义RNA阻断基因表达都是因体外制备的单链RNA中污染极少量双链RNA(dsRNA)所引起的,并发现在线虫中导入dsRNA,mRNA明显减少,推论存在某种机制特异地破坏降解内源mRNA,导致某个基因沉默,即转录后基因沉默(PTGS)。在此情况下,启动子是活跃的但不能正?;踡RNA。这种现象被称为RNA干涉(RNAi)。研究表明RNAi现象广泛存在大多数真核生物中,起到自行监控细胞中异常的mRNA、封闭该基因表达、抵御病毒感染及阻断转座子的作用。
  最初在植物中研究RNAi的实验是使水稻中报告基因GUS沉默,来比较正义链、反义链及dsRNA诱导RNAi效率的高低。近年来利用RNAi技术在水稻、拟南芥、芸薹属、油菜、烟草及棉花上,已经进行了一些基因功能验证的相关研究[3]。
  研究表明,在植物体中,信号分子siRNA可通过植物的维管系统运输。将目标基因特异性序列以正向和反方分别插入标记基因或内含子的5’端和3’端,再在一端连接一个启动子,用转基因技术将反式重复的外源基因导入生物体,诱导表达发夹结构的转录产物RNA(iphRNA),能产生稳定遗传的RNAi现象[5],其诱导目的基因沉默效率高,适用性广,应用潜力大。

dsRNA或iphRNA能通过以下主要两种方法到植物:

竟博 www.zgsyou.com 农杆菌介导法。将带有能转录成ihpRNA的反式重复的外源基因的T-DNA质粒,通过农杆菌介导整合到植物基因组上。
病毒诱导基因沉默(VIGS)。目标序列整合入病毒基因序列,通过农杆菌介导转化ihpRNA表达。

pSGRNAi Vector---植物RNAi载体首选

竟博JBO已经验证的植物有:拟南芥、水稻、黄花菜、红苕,玉米等。
根据目的基因来源,可选择构建35S或Ubi启动子的RNAi载体。

VIGS系统

病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)是指携带目标基因片段的病毒侵染植物后,可诱导植物内源基因沉默、引起表型变化,进而根据表型变异研究目标基因的功能。VIGS是根据植物对RNA病毒防御机制发展起来的一种技术,其内在的分子基础可能是转录后基因沉默(post-transcript gene silence)。因此,VIGS一经建立,即被视为研究植物基因功能的强有力工具,得到了深入的研究和广泛应用,已用于烟草、番茄等植物的抗病反应、生长发育以及代谢调控的功能基因研究。

相应的pTRV1和pTRV2载体配套使用,用于植物RNAi。

植物RNAi载体构建的服务要求

目的基因序列或者登录号;
需要的启动子和筛选基因。

植物RNAi载体构建的基本流程

设计引物,
构建siRNA茎环结构;
根据要求,构建载体;
测序验证。

植物RNAi载体构建的实验报告内容

RNAi质粒及甘油菌株,测序报告和详细实验报告。

发送到info@www.zgsyou.com或电话咨询竟博JBO技术部。

咨询电话:010-56545250 57421144  QQ: 78001304

 

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